RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)即 cDNA 末端快速扩增技术,是以部分区域已知序列为起点,对未知基因的 cDNA 末端快速扩增技术。本制品是使用 Total RNA 或 Poly A+ RNA 作为模板进行反转录,快速扩增获得 cDNA 5’ 末端和 3’ 末端序列的试剂盒。试剂盒包含 5’ RACE 和 3’ RACE 扩增所需组分,可根据需求进行选择。
进行 5’ RACE 时,利用反转录酶的模板转换活性(Template-switching),在 RNA 的 5’ 末端添加接头,可直接进行 RACE PCR 扩增,不需要 Adaptor 连接等步骤,整个流程更快、操作更简单;PCR 扩增体系使用本公司性能优越的 L-Exp Taq HS DNA Polymerase,具有扩增长片段或高 GC 含量等复杂片段扩增能力,精心优化的 Buffer 体系,使得本制品具有较高的特异性,可减少 RACE 实验中的弥散现象。
本制品包含精心优化的 5’ RACE 和 3’ RACE 反应的所有试剂,请使用本试剂盒包含的试剂进行反转录和 PCR 扩增实验,如需替换,请先进行验证。
组分(Package 2-1,-80℃保存) | 规格 |
Template Switching Oligo (TSO) (24 µM) | 10 μl |
Control Mouse Liver Total RNA(1 µg /μl) | 10 μl |
组分(Package 2-2,-20℃保存) | 规格 |
3’RACE RT Primer(12 µM) | 10 μl |
5’RACE RT Primer(12 µM) | 10 μl |
Random Primer(20 µM) | 10 μl |
RNase Inhibitor(40 U / μl) | 10 μl |
5X RACE RT Buffer | 40 μl |
Evo M-MLV RTase for RACE(100U /μl) | 20 μl |
dNTP Mix(10mM each) | 120 μl |
10X Universal Primer Mix | 400 μl |
Tricine EDTA Buffer | 1 ml X 2 pcs |
Universal Short Primer(10 µM) | 50 μl |
Control 5′-Gene-Specific Primer(10 µM)* | 25 μl |
Control 3′-Gene-Specific Primer(10 µM)* | 25 μl |
L-Exp Taq HS DNA Polymerase(5U /μl) | 25 μl |
5X L-Exp Taq PCR Buffer (Mg2+ plus) | 500 μl |
Nuclease free water | 1 ml |
*:使用 Control 5′-Gene-Specific Primer 扩增出的 DNA 片段长度为 1.6 kb;使用 Control 3′-Gene-Specific Primer 扩增出的 DNA 片段长度为 0.6 kb。
2、Evo M-MLV RTase for RACE 具有较强的反转录能力,对于长片段及复杂结构模板能进行较好的反转;
保存温度:Package 2-1 -80℃保存 Package 2-2 -20℃保存
运输温度:Package 2-1 干冰运输(避免反复冻融) Package 2-2 -20℃冰袋运输或干冰运输